微生物培养与分离方法

 上面一节,冷柜价格已经告诉我们,细菌对冷柜中冷冻食品的影响是很重要的,如果超标,就会严重影响我们的健康,下面就来继续了解这方面的知识吧。一般从食品卫生的角度,对指标细菌的测定通常采用检测中温菌(Mesoj
philes)的方法,严格地说,是检测好气性中温细菌方法。所以采用这种方法,气要是考虑到与肠内细菌等的污染关系,这种检测与培养基种类和培养基温度有关。由于各国不同,或食品种类不同,对培养基的温度也有若干不同的规定,通常是将32~35℃,35~37℃作为培养温度,培养时间为24小时和28小时。

大多数细菌均可以通过人工方法培养,而衣原体和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊细胞株及动物接种。只有将微生物培养出来才能对它进行研究、鉴定和应用。

   
细菌计数有其实际价值,因为在生产过程中,对各个阶段的许多试样进行常规检验时,可从细菌计数来评价加工制造过程中的卫生情况。如果已知某一批产品的时间和温度,那么通过一定数目试样的检验数据就可以对该食品的卫生情况作出评价。

一、接种与分离方法

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根据待检标本的性质、培养目的和所用培养基的种类,采用不同的接种方法。

   
在正常条件下,许多开放式的食品中的细菌往往是从各种设备或传送带的表面沾染的,即使对于设备进行经常的清洗,也总会有少量的病菌会通过容器、设备、传送带的表面,使产品受到污染,有时小的菌块甚至直接会落到产品中去。这种感染方式说明,细菌在生产线上不是均匀分布到产品上去的,因此在检查中,不能遁为一个试样出现阳性反应就否定全部产品。然而必须知道,食品上沾染的细菌确实可能致使产品全部变坏,如不及时采取杀灭措施,即使受到极小量的细菌污染,也.会导致严重的后果。从这个意义上说,细菌学的检查法是整个生产线上不可缺少的监测手段。通过检测,可以判明原料鲜度、生产线上的卫生状况、温控和操作人员卫生情况等,但这不能完全保证食品的安全性,由于不同品种和不同季节,其检查的菌种也不同。

1.平板划线分离培养法

对混有多种细菌的临床标本,采用划线分离和培养,使原来混杂在一起的细菌沿划线在琼脂平板表面分离,得到分散的单个菌落,以获得纯种。临床送检的标本如痰、咽试子、泌尿生殖道的分泌物和粪便等细菌检验均需要借助琼脂平板划线分离目的菌。平板划线分离法通常有两种方法:

分区划线分离法:此法常用于含菌量较多的标本如痰、泌尿生殖道的分泌物和粪便或混合细菌的分离。先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区并作数条划线,再于2、3、4区依次划线。每划完一个区域,均将接种环烧灼灭菌1次,冷后再划下一区域,每一区域的划线均与上一区域的划线交接1~3次。一个成功分区划线的平板,培养后分别观察1区形成菌苔,2区菌落连成线,3区和4区可分离到单个菌落。

连续划线分离法:此法常用于含菌量不多的标本或培养物中的细菌分离培养。方法是先将接种物在琼脂平板上1/5处轻轻涂抹,然后再用接种环或拭子在平板表面曲线连续划线接种,直至划满琼脂平板表面。

琼脂斜面接种法

主要用于菌落的移种,以获得纯种进行鉴定和保存菌种等。用接种环挑取单个菌落或培养物,从培养基斜面底部向上划一条直线,然后再从底部沿直线向上曲折连续划线,直至斜面近顶端处止。生化鉴定培养基斜面接种,用接种针挑取待鉴定细菌的菌落,从斜面中央垂直刺入底部,抽出后在斜面上由下至上曲折划线接种。

3.穿刺接种法

此法多用于半固体培养基或双糖铁、明胶等具有高层的培养基接种,半固体培养基的穿刺接种可用于观察细菌的动力。接种时用接种针挑取菌落,由培养基中央垂直刺入至距管底0.4cm处,再沿穿刺线退出接种针。双糖铁等有高层及斜面之分的培养基,穿刺高层部分,退出接种针后直接划线接种斜面部分。

4.液体培养基接种法

用于各种液体培养基如肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等的接种。用接种环挑取单个菌落,倾斜液体培养管,在液面与管壁交界处研磨接种物。此接种法应避免接种环与液体过多接触,更不应在液体中混匀、搅拌,以免形成气溶胶,造成实验室污染。

5.倾注平板法

美高梅4688网址,本法主要用于饮水、饮料、牛乳和尿液等标本中的细菌计数。取纯培养物的稀释或原标本1ml至无菌培养皿内,再将已融化并冷却至45~50℃左右的琼脂培养基15~20ml倾注入该无菌培养皿内,混匀,待凝固后置37℃培养,长出菌落后进行菌落计数,以求出每毫升标本中所含菌数。先数6个方格中菌落数,求出每格的平均菌落数,并算出平皿直径,然后按下列公式计数,求出每毫升标本中的细菌数。

全平板菌落数=每方格的平均菌落数×лr2

每ml标本中的细菌数=全平板菌落数×稀释倍数

6.涂布接种法

本法多用于纸片扩散法药敏试验的细菌接种。将一定量或适量的菌液加到琼脂培养基表面,然后用灭菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反复涂布,使被接种液均匀分布于琼脂表面,然后贴上药敏纸片,或直接培养,本法经培养后细菌形成菌苔。

二、细菌的培养方法

根据不同的标本及不同的培养目的,可选用不同的培养方法。通常把细菌的培养方法分为需氧培养、二氧化碳培养、微需氧培养和厌氧培养四种。

1.需氧培养

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